一、实验目的

1．掌握静态法固定液涂布技术；

2．掌握柱填装及老化技术。

二、方法原理

一根良好的色谱柱不仅与选择合适的固定液和载体有重要关系，而且与固定液涂布在载体表面是否均匀，以及固定相填装是否均匀紧密密切相关。本实验采用静态法涂布。涂布时要求做到载体不破碎，液膜均匀。涂布完毕后，进行柱的填装。填装好的柱子不能马上使用，需要老化处理。所谓老化，即将色谱柱置于高于所要求的柱温下进行实验，以除去残余溶剂和其他杂质，并使固定液均匀、牢固地分布在载体表面。

三、仪器设备与试剂材料

1．仪器：台称；分析天平；真空泵。

2．试剂：6201载体（60～80目）；乙醚；邻苯二甲酸二壬酯（色谱固定液），NaOH溶液。

四、实验步骤

1．色谱柱的清洗

将不锈钢柱用5%～10%的热NaOH溶液抽洗数次，以除去内壁污物，再用水冲洗干净，烘干备用。

2．固定液涂布

固定液的配比：邻苯二甲酸二壬酯（DNP）:6201载体＝5:100。

将市售载体（60～80目）过筛，除去过细颗粒。称取8g载体，置于50mL量筒内，记下体积。称取0.4g DNP于小烧杯中。用量筒量取略少于载体体积的无水乙醚，并分数次将DNP全部转移至400mL烧杯中，将载体倒入，迅速摇匀，使乙醚淹没全部载体。于室温下，置于通风橱内，让乙醚挥发，并适当轻轻拍打烧杯，帮助载体翻转。直至无乙醚气味止。

3．柱的填装

在柱一端塞入少许玻璃棉，用数层纱布包住，与真空泵相连。另一端接漏斗。启动真空泵，边抽气边从漏斗上慢慢加入已涂布好的载体，并轻轻敲打柱壁，直至载体不再下沉为止。在另一端也塞上玻璃棉。

4．老化

将柱接入色谱仪（注意将接真空泵的柱端与检测器相连，但在老化时，只需接与气化器相连接的一端），并检漏。检漏方法是：通入载气后，柱出口堵死，转子流量计应下降至零。否则，应在各接头处用肥皂水检查。检查毕，擦干肥皂水，调节柱温至95℃，老化数小时，直至基线平直为止。至此，柱已可供分析使用。

五、注意事项

1．涂布固定液时，切忌用玻棒搅拌载体。

2．填充时不得敲打过猛。

3．当需使用乙醚时，应在通风橱内操作。

六、问题讨论

1．载体颗粒受外力作用破碎，对分离有何危害？

2．固定液涂布不均，对分离有何危害？

3．老化时，为什么要将接真空泵的柱端与检测器相连？不老化有何危害？