一、实验目的

1．进一步熟悉高效液相色谱分析操作；

2．学习高效液相色谱保留值定性方法；

3．巩固归一化法定量方法。

二、原理提示

在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯，它们都是强极性化合物。可采用反相液相色谱进行分析，选用非极性的C₁₈烷基键合相作固定相，甲醇水溶液作流动相。

由于在一定实验条件下，酯类各组分的保留值保持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物的各组分保留时间，与已知纯酯类各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各组分存在与否。这种利用纯物质对照进行定性的方法，适用于来源已知、且组分简单的混合物。

三、要求

1．拟定实验方案。

2．列出所需仪器、器皿、试剂等。

3．写出详细的实验步骤。

4．按拟定的实验方案、步骤完成实验测定工作。

四、问题讨论

1．本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由。

2．在高效液相色谱中，为什么可利用保留值定性？这种定性方法可靠吗？