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1．基本原理
一束单色光通过有色溶液时，溶液中的溶质能吸收其中的一部分。物质对光的吸收是有选择性的，一种物质对不同波长的光吸收的程度不同。
用透光率或光密度表示物质对光的吸收程度。如果入射光强度用I0表示，透射光强度用It表示，定义透光率为以T表示，即T=It/I0。定义1g(I0/It)为光密度(或吸光度、消光度)，以D表示，即D=lg(I0/It)。显然，T越小，或D越大，则溶液，对光的吸收程度越大。
Lambert-Beer定律总结了溶液对光的吸收规律：一束单色光通过有色溶液时，有色溶液的光密度D与溶液的浓度c和液层厚度L的乘积成正比。即：
D=εcL
比例常数叫做做光密度系数(吸光系数)，它与物质的性质、入射光的波长和溶液的温度等因素有关。
由上式可以看出，当液层厚度一定时，溶液的光密度只与溶液的浓度成正比。由T的定义可知，-lgT=cL，在同样条件下，透光率的负对数与溶液的浓度成正比。测定时一般只读取光密度。
分光光度法就是以Lambert-Beer定律为基础建立起来的分析方法。一般在测量样品前，先测量，一系列已知准确浓度的标准溶液的光密度，画出光密度-浓度曲线，作为工作曲线。样品的光密度测出后，就可以在工作曲线上求出相应的浓度。
2．仪器的安装与使用
(一)安装
打开仪器包装箱后，应按装箱单检查仪器的配套件是否齐全，然后取出仪器电源线安装在仪器右后方的电源插座上，另一端与电源接通。
(二)仪器各部功能介绍
1．样品室门：
打开门(向显示窗方向推，即可打开样品室门)可放置样品，关上门才可进行测量。
2．显示窗：
显示测量值。在不同的功能下，可以分别显示透射比、吸光度及浓度和错误显示。
3．波长显示窗：
显示当前波长值。
4，波长调节旋钮：
调节波长用，当转动波长旋钮时，显示窗的数字随之改变。
5．仪器电源开关。
6．仪器操作键盘。
7．样品池拉手：
前后拉动可改变四位样池的位置。
8．RS232输出口(选配)。
9．打印输出口。
10．电源插座。
(三)键盘
如图13所示：本仪器共有八个操作键，七个工作方式指示灯，当用户每选用一种工作方式时，该指示灯亮，当进行测量时，每按一次操作键其对应指示灯点亮一次，点亮时间与按键时间长短一致。
操作键的具体功能如下：
(1)方式选择键
共有四种工作方式供用户选择。这四种方式是透射比、吸光度、浓度及建曲线，每按此键一次可循环进入下一种工作方式，同时相应指示灯亮，指示当前工作状态。
(2)100％T ABS 0；
调100％键：按此键后计算机对当前样品采样，调整电气系统放大量，并使显示器显示为100.0(％T)或0.000(ABS)。
按下此键后，仪器所有键被封锁，当调整100％T结束后，显示100(％T)或0．000(ABS)后键释放，此键只在透射比及吸光度档起作用。
(3)0％T
调零键调整仪器零点，显示器显示0.0
应在全挡光的情况下，调零。
此键只在透射比档起作用。
(4)选标样点
用户选择(选标样点)功能时，需先按(方式选择)键，使“建曲线”功能指示灯亮，此时仪器处于选标样点建曲线功能状态下。
本仪器有三种曲线拟合方式供用户选择，分别是：1点法(即输入一个标样浓度值建拟合曲线)、2点法(即输入二个标样浓度值建拟合曲线)、点法(同理)。用户选择哪种曲线拟合方式，哪种拟合方式对应的指示灯亮。
用户在进行浓度测量前，必须首先建立标样浓度曲线(即标准样品浓度曲线)。拟合曲线建好后，方可进行浓度测量，使用所选拟合曲线方式进行浓度测量，“第一点”(一点法)、“第二点”(二点法)、“第三点”(三点法)的指示灯，哪个指示灯亮表示选用几点法曲线拟合方式计算浓度。
如：建拟合曲线时输入子两个标样值，则在浓度测量时，把“选标样点”指示灯放在二点法(“第二点”指示灯亮)，表示实际测量选用的标准曲线是用二点法建立的。但若建曲线时，输入的是三个标样值，而在浓度测量时，把“选标样点”指示灯放在宁二点法(“第二点”灯亮)，则此时表示实际测量选用的标推曲线为前两点标样值所建，第三标样值不起作用。具体操作步骤请用户参看(14)。操作步骤中的3浓度直读。
只有在建曲线状态下，选标样点键、置数键(+-)、确认键才起作用。
(5)置数加
标样浓度置入数字增加键，改变显示器数值，可使显示窗显示的数字增大(按键一次数字加1，按键时间超过0.5秒，则数字连续递增)。
该键只在建曲线功能下起作用。
(6)置数减
标样浓度量入数字减少键，改变显示器数值，可使显示窗的数字减少。(按键一次，数字减1，按键时间超过0.5秒，则数字连续递减)。
该键只在建曲线功能下起作用。
(7)确认
当按置数加(减)键置好(使显示窗数字与标样品浓度值一致)所需标样浓度值后按下此键，确认所输入的标样值，并对当前值的信号进行采集，作为标样A值(一个标样浓度值)存入计算机内。
当按确认键时要注意，显示器上的标样浓度应为光路中样品的标样值，当置人另一点标样时应注意改变光路中的标样（拉动样品池拉手移动样品池)，该键只在建曲线功能下起作用。
(8)打印
在不同的方式选择功能下，可打印出透射比值，吸光度值及浓度值，在不同功能下的打印内容如下所示：
①透过率②吸光度③浓度④建曲线
T×××．×A×．×××C×．×××A×．×××
(四)操作步骤
安装好仪器后，检查样池位置，使其处在光路中(拉动拉手应感到每档的定位)。关好样品室门，打开仪器电源开关，方式选择指示灯应在透射比位置，选标样点应在第一点，显示器应为××．×，预热10分种，即可以进行测量。
如果您选购了本仪器配置的微型打印机，则应先连接主机与打印机之间的线缆，插上打印机电源线。请注意：使用时必须先开启主机电源，后开打印机。
1．透射比测量
在样池中，放置空白及样品
①按需要调节波长旋钮，使显示窗显示所需波长值。
②按(方式选择)键使透射比指示灯亮，并使空白溶液处在光路中。
③按(100％T)键调100％，待显示100.0时即表示已调好100％T。
④在样池架中放挡光块，拉人光路，关好样品室门，观察显示是否为零，如不为0.0则按(0％T)调零。
⑤取出挡光块，放人空白溶液，关好样品室门，显示器应显示100.0，若不为100.0则应重调100％T(重复③)。
⑥拉动样品拉手使被测样品依次进入光路，则显示器上依次显示样品的透射比值。
2．吸光度测量
吸光度测量与透射比基本相同，只是有两点要注意。
a．在选择方式②(即l00％T ABS 0)时，应使吸光度指示灯亮。
b．在选择方式③(即0％T)调零时应在透射比功能下(即方式选择指示灯放在透射比档，调零后再将方式选择指示放回吸光度档)。
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